Гормональна стимуляція нересту плідників (Частина 7)

Гормональна стимуляція нересту плідників (Частина 7)

Загальні рекомендації щодо проведення гормонального стимулювання. Підготовку до гормонального стимулювання плідників починають при температурі води, близької до значень, оптимальних для інкубації ікри, які відрізняються у різних видів осетрових Оптимальна температура води (ТºС) для інкубації ікри осетрових

• Ацетонований гіпофіз коропових риб (АГП);
• Гліцеринова витяжка гіпофізів осетрових риб (ГГП);

– «Сурфагон» (GnRHa) – суперактивний аналог гонадотропін релізинг -гормону ссавців (des-Gly10[D-Ala6]GnRHетиламід).

Загальні рекомендації щодо ін’єкції. Висушені ацетоновані гіпофізи розтирають в порошок в чистої чистої фарфорової ступки. Необхідну дозу гіпофіза зважують на торсіонних вагах окремо для самок та самців. До виваженої дозі додають фізіологічний розчин (6,5 г хімічно чистої кухонної солі на один літр дистильованої води) або розчин Рінгерадля холодноводних та обережно перемішують.

Кількість гіпофіза визначають залежно від температури води, маси риби, виду, статі та активності препарату (в жаб’ячих одиницях). Устаткування та матеріали для приготування суспензії гіпофіза:

торсіонні ваги, ступка та маточка для розтирання гіпофізів, розтертий гіпофіз, шприц для ін’єкцій

Для ін’єкцій використовують медичні шприци. Довжину (2,5-3,8 см) та діаметр голки, а також об’єм (1-5 мл) шприца підбирають залежно від розміру риби, дози та типу препарату. При використанні ацетонованих гіпофізів необхідно використовувати голки більшого діаметру (для внутрішньовенних ін’єкцій).

При приготуванні розчину ГГП та суспензії ацетонованого гіпофіза необхідно, щоб обсяг готового препарату для риб масою до 5 кг не перевищував 2 мл, на кожні наступні 5 кг маси риби об’єм розчину збільшується на 1 мл. 

Ін’єкцію робляють у спинні м’язи між спинними та бічними жучками на рівні 3-5 спинної жучки. При введенні препаратів в м’язові тканини необхідно бути обережними і стежити за тим, щоб риба при стисканні м’язів не виштовхнула препарат.

При ін’єкції препарат не повинен вводитися підшкірно, небезпечно також надто глибоке введення голки. Якщо доза препарату для ін’єктування велика, її ділять на дві частини івводять у різні боки спини. Приготування та набір в шприци суспензії ацетонований гіпофіз проводиться за 30-40 хвилин до початку ін’єкцій.

При розведенні гліцеринової витяжки гіпофіза осетрових використовується дистильована вода. Разом з тим слід зазначити, що в останні роки ГДП практично не застосовується, внаслідок припинення виробництва осетрового гіпофіза, одержуваного від дорослих особин, обумовленого забороною промислу осетрових.

Застосування гіпофізарних препаратів. При гормональній стимуляції нересту гіпофізарними препаратами слід віддавати перевагу дробовим ін’єкціям. Загальна доза препарату залежить від температури води та маси риби, а частка попередньої ін’єкції – від ступеня зрілості ооцитів, що оцінюється за значенням коефіцієнта поляризації.

Слід врахувати, що виснажені риби більш чутливі до гіпофізарних ін’єкцій, тому у разі дозування препаратів необхідно риб знижувати. Перевищення дози гіпофіза викликає припинення розвитку зародків на останніх стадіях ембріогенезу. В результаті, вилуплені предличинки мають слабкий, розм’якшений жовтковий мішок і гинуть протягомпершої п’яти діб після вилуплення.

Залежність дози гіпофізарних препаратів від температури води.

– при використанні гіпофизу зі звичайною активністю (3,3 лягушачих одиниць/мг)

Залежність дози гіпофізарних препаратів, вводимих при попередній ін’єкції, від коефіцієнту полярізації ооцитів

Традиційно, самців усіх видів осетрових ін’єктують одноразово, перед роздільною здатністю ін’єкцією самок. Доза гормональних, що вводяться препаратів для самців вдвічі менша за дозу, розраховану для самок.

В експериментах із російським осетром встановлено, що найбільша рухова активність сперміїв відзначається через 36 годин після ін’єкції. Тому рекомендувалося проводити ін’єкції самців за 2-4 години до ін’єкції самок. Для стерляді було показано можливості отримання сперми від самців протягом чотирьох діб після одноразової ін’єкції. При цьому багаторазове зціджування сперми у самців сприятливо позначається на рухливості сперміїв у наступних порціях сперми.

У разі відсутності можливості надійної оцінки якості самців (за допомогою УЗД) рекомендується, особливо, для білуги та перших партій російського осетра, починати ін’єкція самців на 1,5-2 доби раніше, ніж самок. При цьому отриману сперму зберігають у гіпотермічні  Також є можливість неодноразового отримання сперми шляхом повторної ін’єкції гіпофізарним препаратом (ін’єктування GnRHa в цьому випадку менш ефективно) самців, дали повноцінну сперму через 3-4 доби після першого ін’єкції.

При цьому слід зазначити, що цей підхід (за винятком випадку повної відсутності самців) може бути рекомендований тільки для товарного осетрівництва, але не для генетично обґрунтованих програм штучного відтворення, оскільки він призводить до зниження ефективної чисельності формованих популяцій. Повторне одержання сперми відсамців білуги неможливо.

Рекомендації щодо застосування суперактивного синтетичного аналога гонадотропін-релізинг-гормону ссавців (GnRHa,сурфагону). При використанні GnRHa необхідною умовою дозрівання самок є здатність гіпофіза виділяти в кров під дією препарату достатню кількість гонадотропінів. При застосуванні GnRHa негативну роль також може зіграти секреція у кров у відповідь на введення препарату, його інгібітора – дофаміну. Подібна реакція ендокринної системи найчастіше спостерігається у потамодромних видів та форм осетрових риб (стерлядь та сибірський осетр ленської популяції).

Вивчення руху ядра (зародкової бульбашки) та кортикальних реакцій показало, що підвищення дози екзогенного гонадотропіну може призвести до овуляції ікри, навіть при неповному завершенні дозрівання цитоплазми та відсутність компетентності дозрівання ооцитів. На відміну від гіпофізарних препаратів, GnRHa не ушкоджують ооцити, навіть при 400-кратному перевищенні доз ін’єкцій. Дуже важливо, особливо для білуг великого розміру (більше 100 кг), коли не завжди можна точно встановити масу тіла риб. Відсутність негативних наслідків для відтворення при введенні надлишкової дози GnRHa в порівнянні з гіпофізарними ін’єкціями було відзначено для севрюги.

Важливою умовою успішного застосування сурфагону GnRHa є дотримання оптимального температурного режиму з підвищенням температури води на 2-3ºС після першої ін’єкції.

GnRHa не стимулює дозрівання риб в умовах коливань температури (особливо різкого зниження), оскільки не містить гонадотропних гормонів і розрахований на “м’яку” фізіологічну стимуляцію нейроендокринних центрів риб, сприяючи появі ендогенного гонадотропіну, що зазвичай забезпечує високу рибоводну якість ікри.

Препарат малоефективний для хворих, стресованих або травмованих риб, при різких перепадах атмосферного тиску та порушення гідрохімічного режиму.

Найбільш ефективний GnRHa при роботі із самками прохідних видів – севрюги, російського осетра та білуги, та самцями всіх видів, для яких мінімальною дози 1-2 мкг/кг. Препарати можуть вводитися одноразово або дрібно.

Рекомендації щодо застосування GnRHa для стимуляції дозріваннявиробників осетрових риб

У деяких випадках виникає потреба комбінованого застосування гіпофізарних препаратів та GnRHa. У цьому випадку, після попередньою гіпофізарною, проводиться роздільна ін’єкція GnRHa (1,0-1,5 мкг/кг).

Якщо GnRHa ін’єкувати перед гіпофізарним препаратом, існує небезпека, що введений після нього екзогенний гонадотропін буде «зайвим», що призведе до пошкодження (атрезії) ооцитів. Крім того, протягом останніх 15 років, використання традиційного гіпофіза осетрових для стимуляції дозрівання виробників осетрових часто призводило до зниження якості гамет осетрових риб. Порівняльний аналіз реакції севрюги, спійманої в річці, на стимуляцію гіпофізарним препаратом та GnRHa підтвердив, що ін’єкції GnRHa негативно впливає на «річкову» рибу, яка знаходиться ближче до нерестового стану та є каталізатором, що активізує гіпофіз зрілих риб.

(Дивись далі Частину 8)